一、服務(wù)簡(jiǎn)介
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。
經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。
二、技術(shù)流程
1、提取細(xì)胞或組織蛋白、并進(jìn)行蛋白含量；
2、制備SDS-PAGE膠；
3、蛋白樣品變性、電泳；
4、電泳轉(zhuǎn)膜；
4、封閉；
5、加一抗，TBST洗滌；
6、HRP標(biāo)記的二抗BST洗滌；
7、ECL試劑作用；
8、X-光片曝光、顯影或化學(xué)發(fā)光；
9、結(jié)果分析
三、服務(wù)說(shuō)明 1、組織樣本
需要量：每個(gè)樣本至少100mg；
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸
2、細(xì)胞樣本
需要量：每個(gè)檢測(cè)樣本需提供至少5*10^5細(xì)胞量（可做3條帶）；
運(yùn)輸：25T細(xì)胞培養(yǎng)瓶，灌滿培養(yǎng)基新鮮運(yùn)輸或提供細(xì)胞凍存管，干冰運(yùn)輸
3、提好的蛋白
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸
4、一抗
運(yùn)輸：依據(jù)說(shuō)明書(shū)，一般4℃或-20℃運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融
5、蛋白定量結(jié)果（見(jiàn)交付實(shí)驗(yàn)報(bào)告或者交付的Excel）；
6、灰度值分析結(jié)果（Excel ）；
7、膜電泳曝光圖（jpg/png/ppt）
四、成果展示
五、詢價(jià)及訂購(gòu)
感謝您選擇我公司的western-blot檢測(cè)服務(wù)。如有相關(guān)問(wèn)題請(qǐng)聯(lián)系我們的工作人員。